判断Anti-ACA11样本是否完整,可通过「初筛→验证→确认」三步快速判定,结果准确易操作:
第一步:外观初筛(快速排除明显降解)
观察蛋白样本状态:
✅ 澄清透明,无浑浊、絮状物或沉淀→无明显降解,大概率完整;
❌ 出现浑浊、沉淀或分层→已经降解,样本不完整。
第二步:内参WB验证(核心判定依据)
将待测样本和新鲜提取的同来源正常样本,同时跑WB检测拟南芥管家内参(Actin/UBQ,分子量约40kDa):
如果待测样本的内参条带和新鲜样本相比,亮度、清晰度、条带位置一致→样本无明显降解,整体完整;
如果待测样本内参条带明显变暗、弥散模糊,或者无条带→样本已经降解,不完整。
第三步:靶标特征确认(针对ACA11特性验证)
因为ACA11是低丰度膜蛋白,比内参更易降解,需要补充靶标验证:
跑WB检测ACA11,若能在110~115kDa区间检出清晰单一条带,信号强度和新鲜样本无明显差异→确认ACA11完整;
若内参正常,但ACA11无信号,或条带弥散、位置偏移→说明ACA11已经降解,样本不完整。
只有三步结果都符合要求,才能确认Anti-ACA11样本完整,可用于后续检测。